Rola przysadkowego specyficznego czynnika transkrypcyjnego (pit-1 / GHF-1) lub blisko spokrewnionego białka w regulacji cAMP ekspresji ludzkiego podjednostki beta tyypotyny-beta.

Regulację cAMP ludzkiego cAMP thyrotropiny beta (TSH beta) badano w dwóch heterologicznych liniach komórkowych, ludzkiej zarodkowej linii komórek nerkowych (293) i linii komórek przysadki szczura (GH3). W komórkach 293 ludzka ekspresja genu TSH beta nie była stymulowana przez aktywator cyklazy adenylanowej forskoliny lub analog 8-bromo-cAMP analogu cAMP (8-Br-cAMP). Z drugiej strony czynniki te indukowały ekspresję ludzkiego genu TSH beta 4-12 razy w komórkach GH3. Analiza delecji wykazała, że regiony od +3 do +8 pz i od -128 do -61 pz są niezbędne do stymulacji cAMP. Ten ostatni region zawiera trzy sekwencje DNA homologiczne do specyficznego dla przysadki czynnika transkrypcyjnego, Pit-1 / GHF-1, miejsce wiązania DNA. Testy ruchliwości żelowej wykazały, że znakowana izotopowo ludzka sonda TSH beta (-128 do -61 bp) tworzyła pięć swoistych kompleksów DNA-białko z ekstraktem jądrowym mysiego raka tyreotropowego (MTT) i dwoma specyficznymi kompleksami z translokowanym in vitro Pit-1 / GHF- 1. Cztery z pięciu kompleksów MTT i oba kompleksy Pit-1 / GHF-1 in vitro zostały zredukowane lub wyeliminowane przez nadmiar niewyznakowanego miejsca wiązania DNA Pit-1 / GHF-1 z szczurzego genu hormonu wzrostu, ale nie zmutowanej wersji z tego samego fragmentu DNA, co sugeruje, że Pit-1 / GHF-1 lub blisko spokrewnione białko thyrotrof wiąże się z tymi sekwencjami DNA. W komórkach 293, kotransfekcja wektora ekspresyjnego zawierającego cDNA Pit-1 / GHF-1 przywróciła odpowiedź cAMP na ludzki promotor TSH beta (5,2- i 6,6-krotność maksymalnej stymulacji odpowiednio przez 8-Br-cAMP i forskolinę; ), ale nie promotor kinazy tymidynowej wirusa opryszczki (1,2-krotna maksymalna stymulacja przez którykolwiek ze środków). Tak więc wnioskujemy, że ludzki gen TSH beta jest pozytywnie regulowany przez cAMP w GH3, ale nie w komórkach 293. Ponieważ ludzki gen TSH beta zawiera co najmniej jedno miejsce wiązania o wysokim powinowactwie do Pit-1 / GHF-1 w regionie niezbędnym do stymulacji cAMP i stymulacji cAMP można przywrócić do ludzkiego promotora TSH beta w linii komórkowej uprzednio nie reagującej przez dodanie Pit-1 / GHF-1, sugeruje to, że Pit-1 / GHF-1, lub blisko spokrewnione białko w tyreotrofie, może być czynnikiem działającym na zasadzie trans do stymulacji cAMP genu beta TSH.
[więcej w: zielony jęczmień zastosowanie, zespół moebiusa, ziarnica złośliwa i chłoniaki nieziarnicze ]