nzoz pleszew

Spód: Podklon rodzicielski i RNAi Bim KD 18 Komórki Colo205 nie były traktowane lub były traktowane przez 6 lub 24 godziny 20. M UO126 i analizowane za pomocą Western blot na ich poziomy Bim. (B) Rodzicielskie, Bim RNAi KD, i Bcl-2. Nadeksprymujące klony komórek Colo205 traktowano przez 48 godzin, jak wskazano 0. 40. M UO126, i przeżycie komórek badano za pomocą analizy FACS. Dane (średnia . SD z 3 lub 4 niezależnych klonów) wskazują procentową śmierć komórek w stosunku do nietraktowanych komórek. (C) Klonogenne testy przeżywalności macierzystych, Bim RNAi KD i Bcl-2. Nadeksprymujących klony komórek Colo205 bez leczenia lub po 24 lub 48 godzinach traktowania 20. M UO126. Dane są średnie. SD z 3 niezależnych eksperymentów. Hamowanie MEK powodowało indukcję i defosforylację Bim w szeregu zmutowanych linii komórek nowotworowych B-RAF. Następnie rozszerzyliśmy naszą analizę o 3 dodatkowe linie komórek nowotworowych z mutacją B-RAF: SkMel-28, MM200-1 i Mel-RMU. We wszystkich tych liniach komórkowych czerniaka po hamowaniu MEK obserwowano głębokie defosforylowanie ERK1 / 2 i silną indukcję Bim (Figura 4A). Podobne do tego, co zaobserwowaliśmy w komórkach Colo205, analiza mobilności Bim na SDS-PAGE i traktowanie lizatów za pomocą. fosfataza wskazywała, że hamowanie MEK powodowało defosforylację Bim w komórkach SkMel-28 (Figura 4B). Dane te cementują pogląd, że hamowanie MEK powoduje podwyższenie poziomu Bima w zmutowanych komórkach nowotworowych B-RAF. Figura 4 Hamowanie MEK powoduje indukcję i defosforylację Bim w zakresie zmutowanych komórek nowotworowych B-RAF. (A) linie komórkowe pochodzące z nowotworu MM200-1, SkMel-28, Mel-RMU i MCF-7 nie były leczone, leczono 20 .M UO126 we wskazanych punktach czasowych lub traktowano wskazanymi stężeniami UO126 przez 18 godzin i oceniano poziomy Bim, fosforylowanego ERK1 / 2 i całkowitego ERK1 / 2 metodą Western blotting. D, kontrola DMSO. (B) Komórki SkMel-28 nie były traktowane lub były traktowane przez 18 godzin 20 .M UO126, zebrane i poddane lizie. Lizaty nie były leczone lub były leczone. fosfatazę, a następnie ocenia się metodą Western blotting w celu migracji Bim na SDS-PAGE. Strzałka wskazuje słabe rozproszone pasmo Bima obecne w nietraktowanych zdrowych komórkach. (C) Nietraktowane komórki PC3, MM200-1, SkMel-28, Mel-RMU i Colo205 oceniano metodą blottingu Western dla wskazanych białek związanych z apoptozą, wszystkie na tych samych membranach, aby umożliwić bezpośrednie porównania. Indukcja apoptozy wymaga skutecznego antagonizmu wszystkich zapalnych członków rodziny Bcl-2 obecnych w danej komórce przez białka tylko BH3 (18). Bim, w przeciwieństwie do bardziej selektywnych białek tylko BH3 (takich jak Bad), może wiązać się z wysokim powinowactwem do wszystkich członków rodziny Bcl-2, którzy przeżyli w zawrotnym tempie (19, 20). Zatem, przeżycie komórek nowotworowych z mutagenem B-RAF leczonych inhibitorami MEK, pomimo silnej indukcji Bimem, może być konsekwencją wysokich poziomów prosurwalnych białek podobnych do Bcl-2 i / lub bardzo niskich poziomów innych białek tylko BH3. W związku z tym przeprowadziliśmy w tych komórkach kompleksowe białko BH3 i białko podobne do wzrostu Bcl-2. To ujawniło, że wszystkie linie komórkowe SkMel-28, MM200-1 i Mel-RMU zawierały niższe poziomy podstawowe Bim i wyższe poziomy ufosforylowanego ERK1 / 2, a linie SkMel-28 i MM200-1 wykazywały wyższe poziomy Bcl- 2, niż bardziej wrażliwe komórki Colo205 (Figura 4C). Przeciwnie, zawierały one porównywalne poziomy innych członków rodziny Bcl-2, w tym Bmf, Puma, Bad, Bax, Bak i Mcl-1 (Figura 4C). W związku z tym względne poziomy Bim i Bcl-2 mogą przyczyniać się do obserwowanych różnic w czułości różnych zmutowanych komórek B-RAF do apoptozy indukowanej hamowaniem MEK. Mimetyk BH3 ABT-737 synergizuje z hamowaniem MEK w zabijaniu zmutowanych komórek nowotworowych B-RAF. Ponieważ niskie poziomy białek tylko BH3 i / lub wysokie poziomy białek prosowirusowych Bcl-2p mogą ograniczać cytotoksyczną aktywność hamowania MEK (fig. 3 i fig. 4C), próbowaliśmy ustalić, czy mimetyk BH3, taki jak ABT-. 737 (21), może zwiększać zabijanie zmutowanych komórek nowotworowych B-RAF
[hasła pokrewne: ziarnica zlosliwa, ciemnozielony stolec, zielonkawy stolec ]