dermatolog rzeszów rusin prywatnie

Wstępne badania potwierdziły poprzednią obserwację, że inhibitor MEK UO126 silnie hamował proliferację zmutowanych linii komórek nowotworowych B-RAF (V600E) Colo205 i SkMel-28, ale miał niewielki wpływ na linię komórek nowotworowych WT B-RAF PC3 ( Figura 1A). Ponadto stwierdziliśmy, że po zatrzymaniu cyklu komórkowego G1 znaczna część komórek Colo205 i SkMel-28 uległa apoptozie, co wskazano na podstawie zawartości DNA sub-G1 (Figura 1, A i B), jak również cięcia PARP i kaspaza- 3 (Figura 1C). Stopień zabijania komórek nowotworowych zależał od dawki inhibitora MEK, skorelowanej ze zmniejszoną fosforylacją ERK1 / 2 (Figura 1C) i był hamowany przez inhibitor QVD-OPH o szerokim spektrum działania i nadekspresję Bcl-2 (Figura 1D). ). Odkrycia te powielono z niezależnym inhibitorem MEK, PD98059, chociaż był słabszy niż UO126 (Figura 1C i dane nie pokazane). Wyniki te pokazują, że hamowanie MEK powodowało zatrzymanie cyklu komórkowego i apoptozę regulowaną Bcl-2a (zwaną również mitochondrialną lub wewnętrzną apoptozą) w zmutowanych komórkach nowotworowych B-RAF. Figura Hamowanie MEK powoduje zatrzymanie wzrostu i apoptozę w zmutowanych komórkach nowotworowych B-RAF. (A i B) komórki B-RAF WT (PC3) lub zmutowane (SkMel-28 i Colo205) nie były traktowane (NT) lub były traktowane przez 16 lub 72 godziny inhibitorem MEK UO126 (20. M, o ile nie wskazano inaczej), a zawartość DNA określono za pomocą analizy FACS. (A) Przykładowe wykresy FACS pokazują nietraktowane komórki, komórki przechodzące zatrzymanie G1 i apoptozę odpowiednio po 16 i 72 godzinach leczenia UO126. Słupki oznaczają zawartość DNA sub-G1. (B) Procent komórek z zawartością DNA sub-G1 po 72 godzinach. (C) Komórki Colo205 traktowano przez 48 godzin wskazanymi dawkami UO126 lub PD98059. Komórki analizowano metodą Western blotting dla ufosforylowanego ERK (pERK1 / 2), całkowitego ERK, PARP, rozszczepionej kaspazy-3 i P-aktyny jako kontroli obciążenia i oceniano również pod kątem śmierci komórek (pokazano po prawej). W przypadku B i C dane są średnie. SD z 3 niezależnych eksperymentów. (D) Komórki Colo205 nie były leczone lub były inkubowane z 25. M QVD-OPH (QVD) przez 30 minut przed dodaniem 20. M UO126 i ocenione po 48 godz. Dla śmierci komórki i cyklu komórkowego. Komórki Colo205 z nadekspresją FLAG. Bcl-2 oceniano w ten sam sposób. Dane są średnie. SD 3 niezależnych eksperymentów przy użyciu obu klonów FLAG-Bcl-2. (E) Poziomy ekspresji Bcl-2 dla klonów 1-3 i 1-6. Wypełniony histogram reprezentuje barwienie przeciwciałem kontrolnym. Hamowanie MEK powodowało indukcję Bim w zmutowanych komórkach nowotworowych B-RAF. Ponieważ indukowana przez MEK apoptoza komórek Colo205 została zablokowana przez nadekspresję Bcl-2, zbadaliśmy ekspresję innych członków rodziny Bcl-2. Leczenie za pomocą UO126 spowodowało szybką i utrzymującą się indukcję Bim w komórkach Colo205, ale nie w komórkach PC3 (Figura 2A). Spośród znanych izoform Bim, które są wytwarzane przez alternatywne składanie (15), BimEL był eksponowany w największym stopniu, ale wykryto również BimL (Figura 2A). Zakres indukcji Bim w komórkach Colo205 był zależny od dawki i skorelowany z rozmiarem defosforylacji ERK1 / 2 (Figura 2B). Nie zaobserwowano znaczących zmian w innych białkach tylko BH3 (np. Bad, Bid lub Puma), proapoptotycznym Bax i Bak lub białkach prosowirusa Bcl-2, Bcl-w, Bcl-xL i Mcl-1 (Figura 2). , A i B); białko A1 prolurviv było poniżej poziomu detekcji (dane nie pokazane). Wyniki te pokazują, że hamowanie MEK spowodowało swoistą indukcję Bim w zmutowanych komórkach nowotworowych B-RAF. Figura 2 Wpływ hamowania MEK na ekspresję i fosforylację białek tylko BH3 i członków rodziny Bcl-2 z zapadniętymi wrzodami. (A) Komórki B-RAF WT PC3 i zmutowane komórki B-RAF Colo205 nie były leczone lub były traktowane przez 6, 24 lub 48 godzin 20 .M UO126 i oceniano metodą Western blotting w celu ekspresji wskazanych białek.
[przypisy: olx włodawa, ciemnozielony stolec, ziarniak pachwinowy ]