akademicka przychodnia lekarska poznań piątkowska 94

Wrażliwość czułości inhibitora MEK linii komórek nowotworowych o wrażliwym profilu (tj. Colo205, niski Bcl-2 i wysoki Bim) dodatkowo zwiększono przez dodanie ABT-737 w sposób zależny od dawki, co skutkowało znacznie większym zabijaniem niż osiągnięte. z samym lekiem (Figura 5, A i B). Apoptoza wywołana przez tę kombinację leków została zablokowana przez QVD-OPH, co wskazuje, że była zależna od kaspaz (dane nie przedstawione). Ponieważ nadekspresja Bim KD i Bcl-2 powodowała, że komórki Colo205 były oporne na hamowanie MEK, zbadaliśmy, czy te komórki można ponownie zobojętnić przez dodanie ABT-737. Traktowanie samym ABT-737 lub UO126 dawało niewielkie efekty, ale w połączeniu, te leki osiągnęły zabijanie dużych frakcji Bim KD, a nawet komórek B colo205 eksprymujących Bcl-2 a (Figura 5C). Prawdopodobnie najbardziej uderzająca była zdolność 1. M ABT-737 do ponownego uczulenia komórek Colo205 eksprymujących Bcl-2 ., które były całkowicie oporne na samo hamowanie MEK (Figura 5C), a także oporne na apoptozę indukowaną etopozydami (Suplementowa Figura 2). Na poparcie naszej hipotezy, że komórki nowotworowe SkMel-28 i MM200-1 są stosunkowo odporne na hamowanie MEK, ponieważ wykazują one stosunkowo niskie poziomy Bim i wysokie poziomy Bcl-2, leczenie kombinacją UO126 i ABT-737 prowadziło więcej apoptozy w porównaniu z leczeniem samym lekiem (Figura 5D i Dodatkowa Figura 3). Przeciwnie, kombinacja tych samych stężeń UO126 i ABT-737 nie współdziałała w zabijaniu linii komórkowych nowotworu 2 W-RAF WT (Figura 5D). Na koniec, kombinacje UO126 i ABT-737 pokonały supresję apoptozy osiągniętą w komórkach SkMel-28 przez nadekspresję Bim KD i Bcl-2 (dane nie pokazane). Łącznie, te wyniki pokazują, że hamowanie ABT-737 i MEK synergizuje w zabijaniu zmutowanych komórek nowotworowych B-RAF. Figura 5 Adaptacja ABT-737 znacznie wzmacnia indukowaną przez MEK apoptozę zmutowanych komórek nowotworowych B-RAF przez zwiększenie wiązania Bim do Mcl-1. (A i B) Komórki Colo205 traktowano ABT-737 plus 0 lub 20 | jM UO126 (A) lub z UO126 plus 0 lub 1. M ABT-737 (B). Zabijanie komórek oceniano po 48 godzinach, jak opisano na Figurze 3B. (C) Komórki Colo205 eksprymujące Bim RNAi KD lub Bcl-2y traktowano 0 lub 1. M ABT-737 plus 0 lub 20. M UO126, a zabijanie komórek oceniano po 48 godzinach. Dane pokazują procent apoptozy w porównaniu z nietraktowanymi komórkami. (D) Komórki MM200-1, SkMel-28, PC3 lub MCF-7 nie były leczone lub były traktowane 20. M UO126, 1. M ABT-737 lub obydwoma, a zabijanie komórek oceniano po 48 godzinach. W przypadku A. D dane przedstawiają średnią. SD z 3 niezależnych eksperymentów. (E) Komórki Colo205 lub Colo205a Bcl-2 nie traktowano lub traktowano przez 18 godzin .M ABT-737 (A), a lizaty poddano immunoprecypitacji anty-Bim i analizie Western blot. (F) Komórki Colo205 traktowano przez 18 godzin 20. M UO126 (UO) w obecności lub nieobecności 1. M ABT-737. Lizaty poddano immunoprecypitacji anty-Bim i analizie Western blot. (G) Myszy CBA nu / nu zaszczepiono komórkami nowotworowymi Colo205; gdy nowotwory były wyczuwalne dotykowo myszy traktowano 75 mg / kg ABT-737 dziennie przez 2 dni. Guzy zostały wypreparowane 48 godzin później, a lizaty poddano immunoprecypitacji anty-Bim i Western blotting. Dodanie ABT-737 zwiększyło zakres Bim skompleksowany z Mcl-1. Ponieważ indukcja apoptozy wymaga antagonizmu wszystkich cząsteczek zapłodnionych, eksprymowanych w danej komórce przez białka tylko BH3 (18), postawiliśmy hipotezę, że synergistyczne działanie UO126 i ABT-737 może wynikać ze zdolności ABT-737 do wiązania Bcl-2, Bcl-w, i Bcl-xL, uwalniając w ten sposób Bim i pozwalając mu związać się z Mcl-1 i A1. W celu zbadania tego, przeprowadziliśmy immunoprecypitację Bim z komórek Colo205, a następnie Western blotting dla Bcl-xL i Mcl-1 w celu określenia partnerów wiązania z Bim w odniesieniu do prosiwywu w obecności UO126 z dodatkiem lub bez ABT-737.
[patrz też: zolty stolec, zespół tietza, zespół moebiusa ]